技能实训1.3　柱色谱练习

【实验目的】

1.了解用柱色谱法分离提纯化合物的原理；

2.熟悉并掌柱色谱的基本操作。

【实验原理】

柱色谱根据填充成分的不同，可分为吸附、分配、大孔树脂、凝胶、离子交换等种类。

【实验仪器和试剂】

1.仪器：15～20cm色谱柱，分液漏斗，漏斗，洗耳球。

2.试剂：硅胶G（柱色谱分离用），含0.5%甲基橙0.5%亚甲基蓝混合液，95%乙醇。

【实验方法与步骤】

1.装柱

色谱柱中，装入小量脱脂棉，轻轻压平。将干燥硅胶G经漏斗成一细流流入柱中，不要中断，用洗耳球或橡皮锤轻轻敲打柱子下端，使硅胶G填充均匀，紧密适度。然后经分液漏斗沿柱壁注入95%乙醇，使硅胶G全部润湿，同时打开下端活塞，控制流速为1滴/s，并用一烧杯收集乙醇。

2.装样

用滴管将含0.5%甲基橙0.5%甲基蓝的混合液沿柱壁注入，装入柱顶部，待混合液刚好全部进入固定相中，打开滴液漏斗，流入流动相（95%乙醇）。流动相进入速度应适当，即在固定相中顶部有2cm左右流动相即可。

3.洗脱

95%乙醇不断加入，甲基橙易溶于乙醇中而不易吸附在固定相中，随流动相往下洗脱较快，而甲基蓝易被吸附，洗脱速度慢。十几分钟后可见柱子中橙红色甲基橙处于柱子下端，而蓝色的甲基蓝在柱子上端。甲基橙、甲基蓝达到良好分离。

4.收集

根据洗脱液颜色，分别收集乙醇（无色，回收）、甲基橙（橙色）、甲基蓝。

【实验结果与分析】

1.记录甲基橙（橙色）、甲基蓝流出时间。

2.甲基橙（橙色）、甲基蓝流出先后与极性的关系。